9、于盛装被测试液和参比溶液O 按制作材料不同分为石英吸收 池和玻璃吸收池。4443作用★★：是将光强度信号转换为可测电信号，常见检测器有光电池和 光电管。光电池 国产581-G型光电比色计及72型分光光度计。4443I硒光电池结构示意图1 铁片2半导体硒3金属薄膜4入射光优点Ct电池灵敏度较高，产生的光电 池不需要经过放大便可直接用 灵敏检流计测量。缺点：光电池经强光照射或连续使用时 间过长★★，易产生★★“疲劳现象”★★★，导 致灵敏度降低，遇此情况，应暂停使 用并避光放置★★，待其复原后再用★★★。光电管：国产721型分光光度计光电管工作线指示仪表（或记录器）e指ZF器
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3★★、光通过C11SO4溶液时，溶液MX颜色为蓝色。物质的颜色和其吸收光颜色的关系颜色X/ nm黃绿紫400450黄蓝450480橙绿蓝480490红蓝绿490500紫红绿500560紫黄绿560580蓝黄580600绿蓝橙600650蓝绿红650760光收吸IllIII飞收曲线:为了精确表明溶液对不 同波长光的吸收情况★★★，可将不同波长 的单色光依次通过某一固定浓度的有 色溶液★★，测量该溶液对各单色光的吸 收程度，即吸光度，以波长为横坐标★★★， 吸光度为纵坐标作图所得曲线，即为 吸收曲线，或称吸收光谱。IUU/罗粼0S9009三5伯-比尔定律朗伯-比尔定律透光度（透光率D：T丄I★。吸光度★★：A = -lg0朗
4、伯比尔定律：A = -lgT = g = KbcATfc式表明：当一束平行的单色光通 过吸光物质的均匀溶液时，溶液的吸 光度与溶液浓度和液层厚度的乘积成 正比。K:比例常数，与入射光波长，溶液 中吸光物质的本性及溶液的温度有 关。(2)吸光系数当方以cm, c以g/L为单位★★，K为吸光 系数，用符号a表示，单位为L/gcm A=abc当以cm，c以mol/L为单位时，K为 摩尔吸光系数，用符号表示，单位GI =S为 L/ mol McmA-sbca与乞的关系：比吸光系数(E鳥):指质量浓度 为l%(g/mL)为lcm时的吸光度cm值，单位为mL/g 同一物质的占与&之间的关系★★:10-Mx例1 一
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1、第三节比色法和可见分光光度法概述(1)比色法和可见分光光度法的特点 比色法:在分析化学中★★★，利用比较 有色溶液颜色的深浅来测定物质含 量的分析方法称为比色法。过去大 多用眼睛观察比较，故又称目视比 色法。光电比色法（分光光度法）★★★:随着近代分析仪器的发展，目前已普遍使用光电比色计（分光光度计）通 过测量有色溶液对入色光的吸收程度 对物质进行分析，称为光电比色法（分 光光度法）。与目视比色法相比，光度法的特点: 灵敏度高;105-106moVL 准确度较高； 仪器设备较简单，操作简便、 快速； 应用广泛★。(2)光的性质和物质的颜色 光的性质:光是一种电磁波，具 有波粒二象性。光的波动性可用 波长来描
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14、下与被测试样同时进行处理，测吸光 度时以前者所得溶液为参比溶液，称 为平行操作空白。如临床上进行某 种药物浓度的监测，取正常人血样和 待测血药浓度的血样在相同条件下处理★★，用前者得到的溶液作为参比溶 液。何控制适当的吸光度读数范围适宜读数范围：吸光度A在0.15-1.0内,或透光度T值在0.10-0.70内。六★★.比色法和可见分光光度法的定量方法(1)校正曲线法(适用于经常性的批量分析)(2)标准对比法(标准品对照法) 此法适宜于非经常性的分析工作。校正曲线通过零点时，将样品溶液和一标准溶液在选定实验条件下显色★★★，测得吸光度分别为仏和如标准 溶液的浓度为则样品溶液的浓度5 可按下式求得：4=-XsA
15★、★★:物分析中★，为了测定方便★，通常使被测试样称样量和稀释倍数与标准试样一致★★★，则被测试样的含量少可由测量的两者吸光度的比求得，即ACD =-A一卜，在药物分析中，还常用与标准 品的比吸光系数比较进行含量测定。 如被测试样称样量和稀释倍数与标准 品一致★★★，在相同条件下★★，测得被测试样 与标准品的比吸光系数分别为（叽 和（隘）s则试样质量浓度心/L）为P 二(%Wlcm)x-X1000)s 1cm主生旦法和可见分光光度法在医学检 丫 验中的应用全血中铁的测定 全血中铁的测定需要先将各种形式的铁转化为游离的Fe3+离子。通常用 消化法，蛋白质用鹤酸沉淀除去，取无III蛋白的滤液，在一定条件下加KSCN 色剂★★，生成血红色配合物，反应式为Fe3+2SCN = Fe(SCN)2+在520nm波长处或用蓝绿色滤光片 测量吸光度，与标准溶液比较★★★，求出含 量★★。
7、法所用的仪器称为夯光光度计，它是利用分光能力很强的 棱镜或光栅的原理，作为单色器★★，可连 续获得不同波长的单色光，其波长范围 比用滤光片获得的更窄★★。因此用分光 光度计可连续测量某一定浓度有色溶 液在不同波长下的吸光度★★，从而可得其 吸收光谱★，通过吸收光谱可选择最适宜 的测定波长。以分光光度计采用适当的光源和检测器★★★，使测量的范围不只局限于可见光区。如用红外光作为光源成 为红外分光光度法★;用紫外线作为光 源称为紫外分光光度法★。铀t电比色计和可见分光光度计的基本部件光源单色器吸收池1指示器一检测器a.光源要求：光源须具有足够的辐射强度， 且稳定性好★★★。餌灯是可见分光光度计常用 的光源。b单色器光电比色计:
2、述，其单位常用纳米(mn) 表示，波长越短，能量越高。具有同一波长的光称为单色光★，由不 同波长光组成的光称为复合光★。可见光紫外紫蓝青绿 黄 橙红红外400450 480 800nm各种颜色光的波长范围互补色光:若将两种颜色的光按适当的 强度比混合可成白光，那么这两种光称为 互补色光。 绿白光青蓝紫红互补色光示意图物质的颜色★★:物质对光的吸收是具有选择性的O当一束白光通过溶液时，若溶液对各 种色光都不吸收，则白光全部通过， 溶液呈无色透明★★；若各种色光几乎全被吸收★★★，则溶液呈黑色；若溶液只吸收某种色光，则溶液呈透过光的颜色★，也就是说，溶液呈吸收光的互补色光的颜色。例如，白
12★、式为7（3）影响显色反应的因素:显色剂的用量★：显色反应表示式★★★:M+R=MR 显色剂的用量应当适宜，其用量是 通过实验确定。（被测组分）（显色剂）（有色配合物）1★!MNCr(a)(b)吸光度与显色剂浓度的关系Ill实验方法为：固定被测组分的浓度和 其它条件，改变显色剂在溶液中的浓度 仏分别测量吸光度，绘制AYr曲线。pH吸光度与溶液酸度的关系适宜酸度范围确定方法：IllIII固定显色剂和被测组分的浓度， 改变溶液的pH值，分别测量吸光度， 绘制A-pH曲线★★。曲线平坦部分所 对应的pH值即为适宜的酸度范围o作吸光度时间曲线，确定适宜的 显色时间。 显色温度 溶剂的性质 共存离子的干扰及其消除消除共
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11、化合物组成恒定 有色化合物的化学性质稳定 显色剂在测定波长处无明显吸收(2)显色剂显色剂可分为无机显色剂和有机显 色剂两大类。由于大多数有机显色剂能与金属离子形成稳定的有特征 颜色的螯合物，灵敏度较高★★，选择性 也较好。因此，在比色分析和光度分 析中主要选用有机显色剂O两种常用的有机显色剂：z-o-W二氮菲其结构式为1!这是目前广泛用于测定Fe2+的较好的 显色剂。先用盐酸轻胺把待测试液 中的Fe3+还原为Fe2+撚后在pH56 的条件下★★★，与邻二氮菲反应，生成稳定 的橙红色配合物，配合物的人瘁为 508nm 反应是特效的★★★，灵敏度龟较高★★,摩尔吸光系数为11 X 104L/moLcmo★★.双硫腺其结构
8、用滤光片获得单色光。选择滤光片的原则是:滤光片最易 透过的光应是有色物质最易吸收的 光，即滤光片的颜色与溶液的颜色应光度最大时所用的滤光片就是最适宜的滤光片。分光光度计:单色器由棱镜或光栅、 狭缝和准直镜等部分组成。棱镜:色散元件★★，有石英或玻璃两种，它们对不同波长光具有不同的折 射率。石英棱镜对紫外光分光效果好★， 玻璃棱镜对可见光分光效果好★，因为 玻璃对紫外光有吸收★★★，故不能用于紫 外光区★。白光在棱镜中的色散反射面光栅:色散元件★，利用光的衍射和干 涉原理制成★。当白光通过密刻平行条 痕的光栅后，将不同波长的光色散成 连续光谱。具有波长范围宽★★★、色散均 匀、分辨本领高等优点。IIC.吸收池（比色皿）用
5★、含Fe2+浓度为05mg/L的溶 液，用邻二氮菲显色测定，吸收池厚 度为2cm，在508mn处测得吸光度为 0.19,求其摩尔吸光系数和比吸光系 数。rniFe的相对原子质量为55.850.19c(Fe2+) = a- = 8.9xlO6(mol/L) A =tbc=1 1 x 104(L/ mol* cm)A be 2X8.9X1O6E 器=I。X 肃二= 2.OX 103(mL/g-cni)标准曲线★★:根据朗伯比尔定律★★★，当吸收池厚度不变，以吸光度为纵坐 标★，浓度为横坐标作图时★★★，应得到一 条通过原点的直线，称为校正曲线或 标准曲线。偏离朗伯比尔定律的主要原因： 定律仅适用于稀溶液 化学变化引起
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10、00.2 0 15 0.10.05Ax 2.0 1007 0★★.6 0★★★.50 40★★.08090T(%)吸光度与百分透光度标度(3)常用光电比色计和分光光度计 光电比色计★★★：国产581-G型，仪器通 常配有红色★★★、绿色、蓝色三块滤光 片，其透过光的最长分别在650★、 530和440mm左右★。SL见光光度计：国产721型分光光度计721型分光光度计光学系统示意图1光源 2 聚光镜 3 反射镜 4 吸收池5.光电管 6★.狭缝 7★★.准直镜 8.梭镜显色反应:将被测组分转变为有色化合物的反应称为显色反应。显色剂:使被测组分显色的试剂称 为显色剂★★★。 选择性好 灵敏度高(3)有色
6、的偏离（正偏离） 非单色入射光引起的偏离（负 偏离）校正曲线及朗伯一比尔定律的偏离三方法和仪器目视比色法目视比色法★：用眼睛观察比较溶液颜色深 度以测量物质含量的分析方法称 为目视比色法★★★。标准系列法的原理★:12345 待测朗伯比尔定律对标准系列法原 理的解释：标准系列法的优点★★: 仪器简单，操作简便★★，适宜于大批 试样分析 适宜于稀溶液中微量组分的测定 某些不完全符合朗伯比尔定律 的显色反应，仍可用此法进行测 定标准系M法的缺点:准确度较差。(WM比色法和可见分光光度法光电比色法的原理:所用仪器为光电比色计。光源滤光片- 定波长范围的近似单色光T有色溶液- 透过光T 光电池T检流计的标盘可见分光光度
13、存离子干扰的方法★★: a 控制溶液的酸度 b加入掩蔽剂 c 分离干扰离子玄垦度测量条件的选择(1)选择合适波长的入射光 选被测有色物质的入max为入射 光 如在九nax处显色剂或干扰组分 有明显的吸收，则应选灵敏度较 低但能避免干扰的适宜波长的光 作为入射光。(2)选择适宜的参比溶液P?当被测溶液★★★、显色剂及所用其他 试剂均无色，可用纯溶剂作为参比溶液， 称为溶剂空白★★。 当显色剂无色而被测试液中存在 其他有色离子时，可用不加显色剂的被 测试液作为参比溶液，称为试样空白★★★。 当显色剂或其他试剂有色，可用显 色剂或其施试剂祜为参注溶浚掠为试 剂空白★★。IllIIIIII陰用丕含被测组分的试样★，在相同条件
